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62 人阅读发布时间:2026-03-16 09:11
【促销时间】2026年3月15日 — 2026年9月15日(共6个月,限时优惠!)
【产品信息】
产品名称:人肺腺癌细胞(NCI-H3255)
规格:1×10⁶cells/T25培养瓶
目录价:2500元
促销价:1250元(5折优惠!)
【产品应用与优势】
NCI-H3255是携带EGFR外显子21 L858R点突变的肺腺癌细胞系,STR鉴定正确。L858R是EGFR突变NSCLC中第二常见的活化突变类型(约占EGFR突变的40%),对第一代(吉非替尼/厄洛替尼)和第三代(奥希替尼)EGFR-TKI高度敏感。主要应用方向:EGFR L858R型NSCLC三代TKI(吉非替尼/阿法替尼/奥希替尼)体外药效精确比较——L858R vs del19突变背景下的TKI敏感性差异;T790M继发耐药突变形成机制及第三代TKI(奥希替尼)克服T790M耐药的分子机制研究;EGFR L858R/T790M双突变对奥希替尼耐药后(C797S三突变)的四代EGFR抑制剂(EAI045类)体外活性评价;以及MET扩增/ERBB2扩增/BRAF V600E等旁路耐药机制(EGFR-TKI耐药后序贯策略)研究。
【质量保证】
STR鉴定正确,EGFR L858R突变经Sanger测序及ddPCR双重验证,突变等位基因频率>80%
KRAS/BRAF/ALK/ROS1野生型,L858R为驱动突变,实验结果解读明确
对吉非替尼高度敏感(IC₅₀<50nM),EGFR信号通路(pEGFR/pAKT/pERK)完全抑制
贴壁生长,增殖稳定,适合T790M耐药亚系构建(吉非替尼长期低浓度暴露诱导)
【实验流程示意】
① 细胞培养:RPMI-1640 + 10% FBS,37°C/5% CO₂;贴壁培养,每2-3天传代,维持80%融合度。
② 三代TKI纵向比较研究:吉非替尼(第一代)/阿法替尼(第二代)/奥希替尼(第三代)(0.001-10μM,72h)→ CCK-8计算各TKI IC₅₀ → 与NCI-H1648(EGFR del19)对比L858R vs del19的IC₅₀差异(文献报道L858R对TKI敏感性略低于del19)→ Western Blot全面检测EGFR/pEGFR(Y1068、Y1173)、HER2/HER3磷酸化状态、AKT/ERK下游信号抑制程度。
③ T790M耐药亚系构建与验证:吉非替尼(5nM)长期暴露(3-4个月,逐步加量至500nM)→ 建立耐药亚系NCI-H3255-GR → ddPCR检测T790M突变等位基因频率 → 吉非替尼 vs 奥希替尼对耐药亚系IC₅₀对比(预期奥希替尼可克服T790M耐药,IC₅₀<100nM)→ Western Blot验证T790M突变后EGFR在吉非替尼存在下持续磷酸化 → 奥希替尼处理后pEGFR完全抑制。
④ 旁路耐药机制分析:奥希替尼耐药亚系(NCI-H3255-OR,奥希替尼浓度梯度诱导)→ NGS检测C797S三突变出现及MET/HER2扩增 → FISH验证MET扩增拷贝数 → 奥希替尼+卡博替尼(MET抑制剂)联合处理MET扩增耐药亚系 → CCK-8协同指数分析 → Western Blot验证MET扩增绕过EGFR抑制激活PI3K/AKT旁路的机制。
【参考文献】
[1] Paez JG, et al. EGFR mutations in lung cancer: correlation with clinical response to gefitinib therapy. Science. 2004;304(5676):1497-1500.
[2] Ramalingam SS, et al. Overall survival with osimertinib in untreated, EGFR-mutated advanced NSCLC. N Engl J Med. 2020;382(1):41-50.
[3] Thress KS, et al. Acquired EGFR C797S mutation mediates resistance to AZD9291 in non-small cell lung cancer harboring EGFR T790M. Nat Med. 2015;21(6):560-562.
【售后服务保障】
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