SKOV3细胞ATP6V0D2基因过表达细胞株 | 卵巢癌V-ATPase功能研究应用方案

一、产品概述

SKOV3细胞ATP6V0D2基因过表达细胞株是在人卵巢腺癌细胞系SKOV3基础上，通过慢病毒介导的基因过表达技术构建的稳定细胞株。ATP6V0D2编码V-ATPase的d2亚基，该蛋白复合物在维持细胞内酸性微环境和肿瘤微环境酸化中发挥关键作用。卵巢癌细胞常通过V-ATPase调控胞外酸化，促进侵袭和转移。

二、技术方案

2.1 基因功能背景

V-ATPase在肿瘤细胞中常呈高表达，通过维持酸性微环境促进肿瘤进展。ATP6V0D2作为V0结构域的d2亚基，参与质子转运。Morimura等人研究发现，V-ATPase抑制剂Bafilomycin A1可选择性抑制肝母细胞瘤细胞增殖并诱导凋亡，其中ATP6V0D2相关转录本表达显著下调（PMID: 18712525）。

2.2 构建策略

本细胞株采用慢病毒感染法将ATP6V0D2编码序列导入SKOV3细胞，经嘌呤霉素筛选获得稳定过表达株。构建流程包括：基因克隆→慢病毒包装→感染SKOV3细胞→抗生素筛选→单克隆扩大培养→STR鉴定及过表达验证。

2.3 验证方法

通过qRT-PCR检测ATP6V0D2 mRNA表达水平，Western blot验证蛋白过表达效果。细胞经STR鉴定确保细胞身份正确，支原体检测确保无污染。

三、实验案例

3.1 V-ATPase抑制剂对肿瘤细胞的选择性抑制

Morimura等人使用V-ATPase特异性抑制剂Bafilomycin A1处理肝母细胞瘤细胞，发现其可选择性抑制肿瘤细胞增殖并诱导凋亡，而对正常人肝细胞的抑制效应可忽略。基因芯片分析显示，Bafilomycin A1处理后ATP6V0D2、ATP6V1B1和ATP6V0A1三个V-ATPase相关转录本表达显著下调，提示以V-ATPase基因为靶点开发抗肿瘤药物的可行性（PMID: 18712525）。

3.2 ATP6V0D2在食管癌中调控EMT

Qi等人研究发现ATP6V0D2在食管癌中呈促癌作用，通过调控EMT、细胞周期和凋亡相关标志物促进肿瘤发生。敲低ATP6V0D2后E-cadherin表达增强，N-cadherin、Vimentin和MMP9降低（PMID: 32240421）。

3.3 ATP6V0D2与Kras驱动癌症能量代谢

Yang等人发现在KrasG12D驱动细胞中ATP6V0D2显著上调，敲低后抑制细胞运动和侵袭（PMID: 30746744）。

四、产品应用

1. 卵巢癌侵袭迁移研究：利用SKOV3-ATP6V0D2过表达细胞株，研究V-ATPase对卵巢癌细胞侵袭能力的影响。

2. 肿瘤微环境酸化研究：探究ATP6V0D2过表达对卵巢癌细胞外酸化的调控作用。

3. V-ATPase抑制剂筛选：以ATP6V0D2过表达细胞为模型，筛选靶向V-ATPase的抗肿瘤化合物。

4. EMT机制研究：分析ATP6V0D2对卵巢癌EMT标志物的调控。

5. 细胞凋亡研究：研究ATP6V0D2过表达对卵巢癌细胞凋亡通路的影响。

五、参考文献

[1] Morimura T, Fujita K, Akita M, et al. The proton pump inhibitor inhibits cell growth and induces apoptosis in human hepatoblastoma. Pediatric Surgery International, 2008, 24(10): 1087-1094. 主要研究：V-ATPase抑制剂选择性抑制肝母细胞瘤细胞增殖并诱导凋亡。

[2] Qi M, Liu DM, Ji W, et al. ATP6V0D2, a subunit associated with proton transport, serves an oncogenic role in esophagus cancer and is correlated with epithelial-mesenchymal transition. Esophagus, 2020, 17(4): 456-467. 主要研究：ATP6V0D2在食管癌中通过调控EMT促进肿瘤进展。

[3] Yang J, Guo F, Yuan L, et al. Elevated expression of the V-ATPase D2 subunit triggers increased energy metabolite levels in KrasG12D-driven cancer cells. Journal of Cellular Biochemistry, 2019, 120(7): 11690-11701. 主要研究：ATP6V0D2在Kras突变癌症中的表达上调及其对细胞运动和侵袭的影响。

六、产品信息

产品名称：SKOV3细胞ATP6V0D2基因过表达细胞株

规格：T25/冻存管

产品来源：上海淳麦生物科技有限公司

官方网站：www.shcmbio.com

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