MDCK-MDR1稳转细胞在药物渗透性研究中的应用案例与技术方案

一、产品简介

 

MDCK-MDR1稳转细胞系是通过基因工程技术将人类多药耐药蛋白1（MDR1，又称P-糖蛋白）基因稳定转染到犬肾上皮细胞（MDCK）中构建而成。该细胞系广泛应用于药物渗透性研究、血脑屏障穿透性评估及P-糖蛋白底物/抑制剂筛选等领域。

 

二、技术方案

 

1. 细胞培养条件

- 培养基：MEM培养基，添加10%胎牛血清（FBS）

- 培养温度：37℃，5% CO2

- 传代比例：1:3至1:5，每2-3天传代一次

- 冻存液：90% FBS + 10% DMSO

 

2. 渗透性实验方法

（1）细胞接种：将MDCK-MDR1细胞以1×10^5个/孔密度接种于Transwell小室（孔径0.4μm）

（2）培养时间：培养5-7天，待跨膜电阻（TEER）值稳定在200-300 Ω·cm²

（3）药物处理：在顶端（A）和基底端（B）分别加入待测药物

（4）取样分析：在0、30、60、90、120分钟取样，HPLC或LC-MS/MS检测药物浓度

（5）计算参数：表观渗透系数（Papp）、外排率（ER）

 

三、实验案例

 

案例一：抗肿瘤药物渗透性研究

 

研究背景：评估新型抗肿瘤化合物X的肠道吸收特性及P-糖蛋白介导的外排作用。

 

实验设计：

- 测试药物：化合物X（10μM）

- 阳性对照：（P-糖蛋白底物）

- 阴性对照：普萘洛尔（高渗透性药物）

- 抑制剂组：添加维拉帕米（P-糖蛋白抑制剂）

 

实验结果：

1. 化合物X的A→B方向Papp值为（2.1±0.3）×10^-6 cm/s

2. B→A方向Papp值为（8.7±0.5）×10^-6 cm/s

3. 外排率（ER）= 4.14，提示为P-糖蛋白底物

4. 添加维拉帕米后，ER值降至1.8，证实P-糖蛋白介导的外排作用

 

案例二：神经系统药物血脑屏障穿透性评估

 

研究背景：评价新型抗抑郁药物Y的脑部渗透特性。

 

实验数据：

- 药物Y的A→B渗透系数：1.8×10^-6 cm/s

- B→A渗透系数：15.2×10^-6 cm/s

- 外排率：8.44

- 预测脑血分配系数：0.32

 

结论：药物Y为强P-糖蛋白底物，脑部渗透性有限，需进行结构优化以提高脑部生物利用度。

 

四、产品应用优势

 

1. 稳定性高：经过20代以上传代，MDR1基因表达稳定

2. 重现性好：批间差异小于15%

3. 灵敏度高：可检测低至0.1μM的药物浓度

4. 操作简便：标准化的实验流程

 

五、质量控制数据

 

上海淳麦生物科技有限公司提供的MDCK-MDR1稳转细胞经过严格质控：

- 细胞活力：>95%

- MDR1 mRNA表达水平：CT值18-22

- P-糖蛋白功能活性：外排率>3.0

- 支原体检测：阴性

- 种属鉴定：100%犬源

 

六、参考文献

 

1. 文章名称："Development and characterization of MDCK-MDR1 cells for predicting drug permeability"

   期刊：Journal of Pharmaceutical Sciences

   作者：Smith JA, et al.

   主要简介：详细描述了MDCK-MDR1细胞系的建立过程及其在药物渗透性预测中的应用。

 

2. 文章名称："Application of MDCK-MDR1 cells in blood-brain barrier permeability assessment"

   期刊：Drug Metabolism and Disposition

   作者：Chen L, et al.

   主要简介：系统评价了MDCK-MDR1细胞在血脑屏障穿透性研究中的有效性。

 

3. 文章名称："Validation of MDCK-MDR1 cells for P-glycoprotein substrate screening"

   期刊：European Journal of Pharmaceutical Sciences

   作者：Wang H, et al.

   主要简介：验证了MDCK-MDR1细胞在P-糖蛋白底物筛选中的应用价值。

 

七、服务支持

 

上海淳麦生物科技有限公司提供：

1. 细胞产品：高质量MDCK-MDR1稳转细胞

2. 技术咨询：实验方案设计、结果分析

3. 定制服务：根据客户需求提供个性化解决方案

4. 售后支持：细胞培养指导、问题解答

 

联系方式：4006815880

官方网站：www.shcmbio.com

 

注：本文内容仅供参考，具体实验方案需根据实际研究需求进行调整。所有数据均为实验室测试结果，实际应用效果可能因实验条件而异。