ATP1B4基因编辑HCT116细胞在结直肠癌Wnt通路研究中的技术方案

ATP1B4基因编辑HCT116细胞在结直肠癌增殖与Wnt通路研究中的技术方案

ATP1B4是钠钾泵β4亚基，在进化中获得了核内信号转导功能。结直肠癌中Wnt/β-catenin通路激活是核心驱动事件，ATP1B4的核内信号功能可能与Wnt通路存在交互调控。本文以上海淳麦生物科技有限公司提供的ATP1B4基因编辑HCT116细胞（人结直肠癌细胞）为基础，构建研究技术方案。

一、ATP1B4与Wnt通路的潜在关联

Pestov等（2007, 2011）证实ATP1B4在细胞核中的定位及其转录调控功能【1】【2】。Korneenko等（2016）发现ATP1B4在应激应答中的调控作用【3】。HCT116细胞携带β-catenin突变，Wnt通路高度激活，是研究Wnt信号的经典模型。ATP1B4的核内信号功能可能通过以下方式与Wnt通路交互：（1）直接调控Wnt靶基因转录；（2）影响β-catenin核内稳定性；（3）通过应激应答通路间接调控Wnt活性。

二、技术方案

1. Wnt通路活性检测：利用TOPflash报告基因实验检测ATP1B4敲除对HCT116细胞Wnt转录活性的影响。

2. β-catenin核转位：免疫荧光检测ATP1B4敲除后HCT116细胞核内β-catenin水平变化。

3. 转录组分析：RNA-seq鉴定ATP1B4敲除后Wnt靶基因表达变化。

4. 增殖与克隆形成：CCK-8和软琼脂克隆形成实验评估ATP1B4敲除对HCT116细胞增殖和转化能力的影响。

三、产品信息

上海淳麦生物科技有限公司提供ATP1B4基因编辑HCT116细胞。欢迎访问www.shcmbio.com了解详情，服务热线：4006815880。

参考文献

【1】Pestov NB, et al. PMID:17592128, 2007.

【2】Pestov NB, et al. PMID:21855530, 2011.

【3】Korneenko TV, et al. PMID:26939788, 2016.