A375细胞ATP1B4基因过表达细胞株 | 黑色素瘤BetaM蛋白功能研究应用方案

一、产品概述

A375细胞ATP1B4基因过表达细胞株是在人恶性黑色素瘤细胞系A375基础上，通过慢病毒介导的基因过表达技术构建的稳定细胞株。ATP1B4编码BetaM蛋白，该蛋白在胎盘哺乳动物中经历了独特的功能演化，从Na,K-ATPase β亚基转变为肌肉特异性核内膜蛋白，参与基因表达调控和信号通路互作。

二、技术方案

2.1 基因功能背景

ATP1B4基因在脊椎动物进化中经历了显著的功能转变。Pestov等人研究发现，在胎盘哺乳动物中BetaM丧失了作为Na,K-ATPase β亚基的祖先功能，获得了核内膜定位和基因调控能力，通过与转录共调节因子SKIP相互作用调节TGF-β信号通路（PMID: 17592128）。Korneenko等人进一步扩展了BetaM互作蛋白组的鉴定，发现其与核膜蛋白LAP-1、Syne1、血红素加氧酶HMOX1/HMOX2、转录因子LZIP/CREB3等多种蛋白相互作用（PMID: 26939788）。

2.2 构建策略

本细胞株采用慢病毒感染法将ATP1B4编码序列导入A375细胞，经嘌呤霉素筛选获得稳定过表达株。构建流程包括：基因克隆→慢病毒包装→感染A375细胞→抗生素筛选→单克隆扩大培养→STR鉴定及过表达验证。

2.3 验证方法

通过qRT-PCR检测ATP1B4 mRNA表达水平，Western blot验证蛋白过表达效果。细胞经STR鉴定确保细胞身份正确，支原体检测确保无污染。

三、实验案例

3.1 BetaM互作蛋白组的进化多样性

Korneenko等人通过酵母双杂交和分裂泛素系统筛选真兽类和鸟类cDNA文库，鉴定了BetaM的互作蛋白组，包括核膜蛋白LAP-1、Syne1、BetaM自身、血红素加氧酶HMOX1和HMOX2、转录因子LZIP/CREB3、ERGIC3、PHF3、网钙结合蛋白-3和β-肌聚糖。未发现鸡BetaM和人Na,K-ATPase β1、β2、β3亚基有新互作，表明真兽类BetaM互作蛋白组的独特性。截短分析显示核质域中靠近膜的72-98残基对与SKIP的互作至关重要（PMID: 26939788）。

3.2 BetaM调控MyoD表达

Ahmad等人发现BetaM可刺激MyoD表达，结合到MyoD的DRR区，促进表观遗传变化并招募BRG1（PMID: 36836771）。

3.3 ATP1B4与代谢调控

Modyanov等人发现Atp1b4敲除小鼠代谢能力增加、肥胖减少（PMID: 40724605）。

四、产品应用

1. 黑色素瘤基因调控研究：利用A375-ATP1B4过表达细胞株，研究BetaM对黑色素瘤基因转录的影响。

2. 蛋白互作网络研究：分析BetaM与SKIP、LAP-1、HMOX1等蛋白的互作在黑色素瘤中的功能。

3. TGF-β信号通路研究：探究BetaM对黑色素瘤TGF-β信号通路的调控。

4. 细胞代谢研究：研究ATP1B4过表达对黑色素瘤细胞代谢重编程的影响。

5. 黑素体pH调控研究：分析BetaM/V-ATPase相关通路对黑素体酸碱平衡的影响。

五、参考文献

[1] Korneenko TV, Pestov NB, Ahmad N, et al. Evolutionary diversification of the BetaM interactome acquired through co-option of the ATP1B4 gene in placental mammals. Scientific Reports, 2016, 6: 22395. 主要研究：BetaM互作蛋白组的进化多样性和结构基础。

[2] Ahmad N, de la Serna IL, et al. Eutherian-Specific Functions of BetaM Acquired through Atp1b4 Gene Co-Option in the Regulation of MyoD Expression. Life, 2023, 13(2). 主要研究：BetaM通过调控MyoD调节肌肉基因表达。

[3] Modyanov NN, et al. Ablation of the Evolutionarily Acquired Functions of the Atp1b4 Gene Increases Metabolic Capacity and Reduces Obesity. Life, 2025, 15(7). 主要研究：Atp1b4敲除增加代谢能力。

六、产品信息

产品名称：A375细胞ATP1B4基因过表达细胞株

规格：T25/冻存管

产品来源：上海淳麦生物科技有限公司

官方网站：www.shcmbio.com

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