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82 人阅读发布时间:2026-03-15 20:39
【促销时间】2026年3月15日 — 2026年9月15日(共6个月,限时优惠!)
【产品信息】
产品名称:人肝癌细胞系(HepAD38)
规格:1×10⁶cells/T25培养瓶
目录价:4000元
促销价:2000元(5折优惠!)
【产品应用与优势】
HepAD38是将HBV基因组(ayw亚型,1.1倍基因组)整合入HepG2细胞并由四环素(Tet-off系统)调控表达的稳定细胞系。撤除四环素后,细胞可高效复制HBV,产生完整S/preS、HBeAg和病毒颗粒,是全球抗HBV药物研发(核苷类似物/核心蛋白抑制剂)和HBV生活周期机制研究的黄金标准工具细胞。主要应用方向:新型抗HBV药物(恩替卡韦/替诺福韦/核心蛋白抑制剂JNJ-56136379)体外活性筛选;HBV pgRNA包装及逆转录复制过程的分子机制研究;HBsAg/HBeAg分泌调控及免疫逃逸机制分析;以及cccDNA形成与持久感染机制基础研究。
【质量保证】
STR鉴定正确,Tet-off调控系统稳定,撤四环素72h内HBV DNA复制显著启动
HBsAg/HBeAg分泌可ELISA定量,灵敏度高,药物筛选信号窗口宽(S/B>10)
对恩替卡韦/替诺福韦敏感(EC₅₀<1nM),抗病毒活性验证标准参照
可稳定传代,HBV复制水平代间差异<20%,保证批间可重复性
【实验流程示意】
① 细胞培养与HBV诱导:DMEM + 10% FBS + 四环素(1μg/mL,抑制HBV复制)→ 实验前撤除四环素换用无四环素培养基 → 继续培养72h → ELISA检测培养上清HBsAg确认HBV诱导成功(OD值>2.0为诱导有效)。
② 抗HBV药物活性筛选:撤四环素同时加入受试化合物(0.001-10μM)→ 培养5天 → 收集细胞上清 → HBsAg ELISA(药物对HBs分泌的抑制率)→ HBeAg ELISA(核心蛋白相关抑制)→ 细胞内HBV DNA提取(DNeasy kit)→ qPCR定量分析病毒DNA复制水平 → CCK-8检测化合物细胞毒性(计算选择指数SI=CC₅₀/EC₅₀)。
③ 核苷类似物耐药突变研究:构建HBV聚合酶耐药突变体(rtM204I/V、rtL180M)→ 转染HepAD38 → 恩替卡韦处理 → 对比野生型与突变株EC₅₀差异 → Western Blot检测核心蛋白(HBcAg)表达 → 明确耐药机制。
④ cccDNA分析:Hirt提取法分离细胞内共价闭合环状DNA(cccDNA)→ T5核酸外切酶消化线性/松弛环状DNA → qPCR定量cccDNA拷贝数 → 评估受试药物对cccDNA库的影响 → Southern Blot验证cccDNA条带特异性。
【参考文献】
[1] Ladner SK, et al. Inducible expression of human hepatitis B virus (HBV) in stably transfected hepatoblastoma cells: a novel system for screening potential inhibitors of HBV replication. Antimicrob Agents Chemother. 1997;41(8):1715-1720.
[2] Lok AS, et al. Antiviral therapy for chronic hepatitis B viral infection in adults. Hepatology. 2016;63(1):261-283.
[3] Zoulim F, et al. Hepatitis B virus resistance to nucleos(t)ide analogues. Gastroenterology. 2009;137(5):1593-1608.
【售后服务保障】
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