A549 吉西他滨耐药细胞在肺癌研究中的应用案例与技术方案

一、产品简介

二、技术方案

1. 耐药细胞系的建立与鉴定

• 诱导方法：采用逐步增加吉西他滨浓度的方法诱导 A549 细胞耐药。初始浓度为 1nM，处理 72 小时后，存活细胞在无药培养基中培养至 80% 融合，再维持在该浓度培养至生长稳定，随后逐步提高药物浓度，持续 9 个月，之后液氮冻存 3 个月再复苏。
• 鉴定方法：使用 CCK-8 法评估细胞对吉西他滨的敏感性，通过比较耐药细胞与亲本细胞的 IC50 值确定耐药性。此外，还可进行细胞生长实验、集落形成实验、细胞周期分析等，从多个角度评估耐药细胞的特性。

2. 耐药机制研究

• 基因和蛋白表达分析：运用 siRNA 转染技术下调特定基因表达，通过实时聚合酶链反应（qRT-PCR）检测基因表达水平，利用蛋白质免疫印迹（Western blot）分析蛋白表达情况，研究与耐药相关的基因和蛋白。
• 细胞周期和 DNA 损伤检测：通过流式细胞术分析细胞周期分布，利用免疫荧光染色结合显微镜观察 DNA 损伤情况，探究耐药细胞的细胞周期变化和 DNA 修复机制。

三、实验案例

案例一：吉西他滨耐药细胞的化学敏感性评估

• 实验方法：将 A549 吉西他滨耐药细胞与亲本细胞分别接种于 96 孔板中，加入不同浓度的吉西他滨培养 48 小时，使用 CCK-8 法检测细胞活力。
• 实验结果：耐药细胞的 IC50 值显著高于亲本细胞，表明其对吉西他滨的耐药性增强。例如，亲本细胞的 IC50 值为 0.5 µM，而耐药细胞的 IC50 值可达 5 µM。

案例二：耐药细胞的增殖和致瘤能力研究

• 实验方法：通过 CCK-8 法监测细胞增殖，进行集落形成实验和 3D 球状体生长实验，评估耐药细胞的增殖和肿瘤形成能力。
• 实验结果：耐药细胞在吉西他滨存在下仍能稳定增殖，集落形成能力和 3D 球状体大小均高于亲本细胞，表明其致瘤能力增强。

四、产品应用

1. 药物筛选

2. 耐药机制研究

3. 联合用药研究

五、相关文献

• 文献名称：《三株吉西他滨耐药人肝内胆管癌细胞系的建立及鉴定》
• 期刊：动脉网
• 主要简介：该研究通过逐步增加吉西他滨浓度的方法建立了耐药细胞系，并对其耐药性进行了全面评估，为耐药机制研究和药物筛选提供了可靠的细胞模型。