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感受态细胞 | 上海淳麦生物出新品啦!!
人阅读 发布时间:2020-05-28 15:06
Turbo 感受态细胞
产品介绍
上海淳麦生物科技有限公司生产的Turbo感受态细胞是采用大肠杆菌Turbo菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。Turbo菌株是生长最快的大肠杆菌菌株,菌株平板上6.5小时可见克隆,摇菌4-6小时可提取质粒。
核酸内切酶 (endA1)基因的缺失有利于提高质粒DNA的产量和质量。菌株的LacIq基因的表达受到严格控制,可克隆毒性基因。
ΔlacZM15基因的存在可用于蓝白斑筛选。菌株还具有抗T1噬菌体感染的特点。Turbo感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>×109cfu/μg DNA。
基因型
F'proA+B+lacIqΔlacZM15/fhuA2Δ(lac-proAB)glnVgalK16galE15R(zgb-210::Tn10)TetSendA1thi-1Δ(hsdS-mcrB)5
菌株抗性
对氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、四环素敏感
质粒转化步骤
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将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后,加入1-5μl含有1-100ng的质粒DNA或5-10μl连接产物到细胞中,用手指拨打管底,轻轻混匀。
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冰水浴中放置30分钟,不要晃动。
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42℃热击60秒钟,不要晃动。
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冰水浴中放置2分钟,不要晃动。
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加入500μl的室温的SOC或LB培养基。
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置于37℃摇床中,150-200rpm震荡复苏培养60分钟。
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取50-100μl菌液涂布在含有抗性的LB平板上。待液体吸干后,倒置平板,37℃过夜培养。
平板划线分离法
复苏培养结束后,4000rpm离心30秒钟,弃掉上清,留100μl左右的液体,用200μl吸头轻轻吹打散菌块,取10μl重悬的菌液分多点滴在平板上,倾斜吸头,用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落。此方法主要适用于质粒转化,连接产物转化最好用涂布法。
质粒快速转化步骤
对于氨苄青霉素抗性的质粒,将步骤2的时间缩短到5分钟,完成步骤4后,可直接涂布或划线于含氨苄青霉素抗性的LB平板上。其它抗性的质粒仍需60分钟的复苏培养。